欢迎光临南京优纯生物科技有限公司! 联系我们 加入收藏

025-82263158

我们为您真诚的服务

您现在的位置是:首页 > 新闻动态 > 企业新闻

企业新闻

News

罗丹明123说明书

发布时间:2021-12-23   浏览次数:1748

罗丹明123染色检测线粒体膜电位(511-535nm,稀释1000

外观:红棕色粉末

化学名:Rh123 罗丹明123

别名: Rhodamine 123; Rh123

分子式:C21H17CLN2O3

分子量:380.82

纯度:≥95%

配制:罗丹明123粉剂用甲醇配成1mg/mlde 储备液,染色时用DPBS缓冲液将其稀释为所需浓度

保存:冰箱-20度避光

一、检测原理:

罗丹明123Rhodamine 123)是一种可透过细胞膜的阳离子荧光染料,是一种线粒体跨膜电位的指示剂。其在正常细胞中能够依赖线粒体跨膜电位进入线粒体基质,荧光强度减弱或消失。而在凋亡发生时,线粒体膜完整性破坏,线粒体膜通透性转运孔开放,引起线粒体跨膜电位(ΔΨm) 的崩溃, Rh123 重新释放出线粒体, 从而发出强黄绿色荧光,可用荧光显微镜、荧光光度计或流式细胞仪检测,通过荧光信号的强弱来检测线粒体膜电位的变化和凋亡的发生,可用于培养的细胞或从组织中提取出的线粒体的膜电位检测。

二、 使用方法:

1.细胞染色及分析

1)培养细胞1×106/mL重悬于培养基中;

2)加入罗丹明123染液0.1μg/mL50 μg/mL (根椐细胞种类不同而浓度不同,一般310 μg/mL);

337℃,5% CO2细胞培养箱孵育130 min(根椐细胞种类不同而不同,一般10 min);

4)离心以培养基洗细胞两次;

2. 组织提取的线粒体染色及分析

1)按常规方法提取的线粒体,用适量的1×Assays Buffer(将5×Assays Buffer 用水稀释5倍)重悬;

2)常规方法进行蛋白含量测定后,用1×Assays Buffer调配成3mg/mL的线粒体溶液;

3)取2mL 1×Assays Buffer1mL线粒体溶液;

4)加入适量待测化合物(同时设空白对照组),250C保温min

5)加入罗丹明123染液10 μL

6)荧光光度计检测:上述混合液全部加入石英比色皿中,置于250C下测定,激发波长488505nm,发射波长530nm,连续记录从0 min30 min内荧光强度的变化。

三、注意事项

1、操作时需戴手套

2罗丹明123为通透性染料,可以自由进入细胞

3、孵育时,必须避免光照

4、使用时,避免污染母液

5、染色完成后,即刻进行荧光检测分析