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Hoechst33258 荧光染色法

发布时间:2021-8-10   浏览次数:51

Hoechst33258 荧光染色法【试剂盒不同,固定染色时间不同。】

①人肝癌细胞HepG2经常规传代培养至对数期,弃去旧培养液,用0.25%胰蛋白酶溶液消化后制成单细胞悬液,调整细胞密度为1× 106 /ml接种于6孔培养板中。置于37°C、5%CO2 恒温细胞培养箱中培养24h后,观察细胞贴壁情况。

待贴壁细胞密度达到80%后,弃去培养液,用PBS小心冲洗细胞两遍,加入不同浓度的人参皂苷转化物溶液200μl,继续培养24h

24h后消化收集细胞,1000r/min离心5min,弃去上清液;用PBS重悬细胞,1000r/min离心洗涤2 次;

④第二次离心洗涤后留少许上清,用微量加样器吸取细胞在洁净载玻片上涂片,室温自然干燥;随即使用甲醇∶冰醋酸(3∶1)固定液固定15 min;

⑤晾干后于暗处用Hoechst 33258 染色工作液(10mg/l)避光染色10 min后用双蒸水冲洗5min,抗淬灭封片液封片;

⑥置于激光共聚焦显微镜下,激发波长350nm,发射波长460nm,观察细胞凋亡情况并拍照

①人肝癌细胞HepG2经常规传代培养至对数期,弃去旧培养液,用0.25%胰蛋白酶溶液消化后制成单细胞悬液,调整细胞密度为5× 105 /ml,接种于6孔培养板中。置于37℃、5%CO2 恒温细胞培养箱中培养24h后,观察细胞贴壁情况。

②待贴壁细胞密度达到80%后,弃去培养液,用PBS小心冲洗细胞两遍,一孔加入含10%胎牛血清的完全培养液,其余各孔分别加入高、中、低3个浓度的人参皂苷转化物溶液与顺铂溶液200μl,继续培养48h

③倒置显微镜下观察各组细胞生长情况和形态变化。