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常用于免疫荧光组织化学染色的荧光素

发布时间:2020-4-24   浏览次数:485

常用于免疫荧光组织化学染色的荧光素有:异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanat, FITC)、 四甲基异硫氰酸罗丹明(tetramethy1 rhodamine isothioeyanat, TRITC)、 四乙基罗丹明(tetraethy1 rhodamine B20,RB200)、得克萨斯红(Texas red)、 藻红蛋白(phycoerythrin, PE)、 花青类(cyanine,Cy3、Cy5)等。此外还有一些新型荧光染料,如量子点。

(1)异硫氰酸荧光素(FITC): FITC性质稳定,易溶于水和乙醇,能与蛋白质结合,是检测组织细胞内蛋白质最常用的荧光探针。它还能标记抗体,可用F免疫组织化学单染或多重染色。缺点是在光照下易淬灭,易受白发荧光影响。最大激发光波长为490m:最大发射光波长为525nm,呈现黄绿色荧光。

(2)花青类染料:常用的有Cy3Cy5 等,能与细胞内蛋白质结合。这类染料的荧光特性与传统荧光素类似,但水溶性和对光稳定性较强,荧光量子产率较高,对pH等环境不敏感。常用于多重染色。Cy3 最大激发光波长为570nm,最大发射光波长为650nm,呈绿色荧光。但是,在绿光光谱波长激发下,Cy3也可出现红色荧光。Cy5 的最大激发光波长为649nm,最大发射光波长为680nm,呈红色荧光。由于Cy5的最大发射波长为680nm,很难用裸眼观察,而且不能使用高压汞灯作为理想的激发光源,因此,使用普通荧光显微镜时,不推荐使用Cy5。通常观察Cy5时需使用激光扫描共聚焦显微镜。