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X-Gal和IPTG的配制

发布时间:2020-1-17   浏览次数:34

IPTG,中文名称异丙基-β-D-硫代半乳糖苷”,是一种作用极强的诱导剂, 常用于需要诱导 β-半乳糖苷酶活性的克隆实验。

X-Gal 中文名称“5--4--3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷”,是β-半乳糖苷酶(β - galactosidase) 的底物,水解后呈蓝色。基于这个特点,pUC系列载体DNA (或其他带有lacZ 基因载体DNA) lacZ缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体载体DNA进行转染时,如果在平板培养基中加入X-GalIPTG,由于β-半乳糖苷酶的α一互补性,可以根据是否呈现白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑选出基因重组体。

使用方法:

首先把X-Gal配制成20 mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF) 溶液(-20C避光保存),然后在100 ml的琼脂培养基中,加入200 μl的上述溶液、100 μ lIPTG (24 mg/m) 100 μIAmp (100 mg/m), 制作成X-GalIPTGAmp平板培养基。当DNA片段插入至pUC系列载体(或其他带有lacZAmp基因载体),然后转化至lacZ缺失细胞中后,涂布上述的X- GalIPTGAmp平板培养基,可根据长出菌体的蓝白色,而方便地挑选出基因重组体(白色为具有DNA插入片段的基因重组体。