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化学发光免疫分析类型

发布时间:2019-12-13   浏览次数:447

化学发光免疫分析法根据其标记物的不同可分为三大类,即直接化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析法。

1. 直接化学发光免疫分析

通常由吖啶酯直接标记抗体(抗原),与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后,形成固相包被抗体待测抗原吖啶酯标记抗体复合物,这时只需加入氧化剂( H2O2 )和NaOH使成碱性环境,吖啶酯便可分解、发光。

2. 化学发光酶免疫分析

从标记免疫分析角度,化学发光酶免疫分析( CLEIA ),应属酶免疫分析,只是酶反应的底物是发光剂,操作步骤与酶免分析完全相同: 以酶标记生物活性物质(如酶标记的抗原或抗体) 进行免疫反应,免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物,在信号试剂作用下发光,用发光信号测定仪进行发光测定。目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP) 和碱性磷酸酶(ALP),它们有各自的发光底物。

1)辣根过氧化酶--鲁米诺( HRP-Luminol )系统

常用的底物为鲁米诺或其衍生物如异鲁米诺。先用辣根过氧化物酶( HRP )标记抗体(或抗原),在与反应体系中的待测标本和固相载体发生免疫反应后,形成固相包被抗体待测抗原-酶( HRP )标记抗体复合物,再加入鲁米诺发光剂、H20,和化学发光增强剂使产生化学发光。

2)碱性磷酸酶--AMPPD ( ALP-AMPPD )系统

通常以AMPPD作为碱性磷酸酶( ALP )的化学发光底物,属于辉光型发光,波长为470 nm。在适宜的缓冲液中,随着酶的催化水解作用,AMPPD分解成AMP-D,后者发出强度很高的光信号,其发光的速度取决于碱磷酶的浓度。

3. 电化学发光免疫分析

电化学发光免疫分析( ECLIA )是以电化学发光剂三联吡啶钌标记抗体(抗原),以三丙胺(TPA)为电子供体在电场中因电子转移而发生特异性化学发光反应它包括电化学和化学发光两个过程。